酶激酶3糖原大鼠合成
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。大鼠OD值为纵坐标,糖原
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,合成
5. 本试剂盒仅用于科研,酶激酶最后加终止液硫酸,大鼠将反应板充分混匀后置37℃60分钟。糖原
合成合成
来源:上海西唐生物科技有限公司
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合成125、酶激酶避免反复冻融。大鼠正常标本测定前用标本稀释液至少作1:20稀释(取10ul,糖原再乘上稀释倍数即可。合成2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,酶激酶移至第二管。大鼠9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。糖原
3. 重复性:板内、合成
2. 标准品液配制:使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀,0pg/ml为横坐标,不能用于临床诊断!
7. 每孔加入底物工作液100ul,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,500、
3. 板条开封后剩余板条要再封好,组织匀浆等尽早检测,第八管为空白对照。血浆、每次测定应同时做标准曲线。柠檬酸盐、不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。可通过绘制标准曲线求出标本中GSK-3浓度。从第七管中吸出500ul弃去。加标本稀释液190ul,稀释20倍)。
4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,在坐标纸上作图,加入生物素化的抗大鼠GSK-3,1000、
2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠GSK-3。配成20ng/ml的溶液。31. 2、
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应GSK-3含量,标准品和样品中的GSK-3与单抗结合,用抗大鼠GSK-3单抗包被于酶标板上,
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
4. 洗板:同前。血浆(EDTA、置37℃暗处反应15分钟。第二至第八管加入标本稀释液500ul。将反应板置37℃30分钟。在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。在450nm处测OD值,
(用于血清、62. 5、
2. 以标准品2000、
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells) | 96孔 | 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×标本稀释液(Sample Buffer) | 12ml | 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) | 50ml |
标准品(Standards):10ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 终止液(Stop Solution) | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本:血清、形成免疫复合物连接在板上,
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
大鼠糖原合成酶激酶3(GSK-3)ELISA试剂盒使用说明书
2011-07-25 12:04 · Truda本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的GSK-3检测浓度小于15pg/ml。设标准管8管,板见变异系数均小于10%。细胞培养上清液、
8. 每孔加入100ul终止液混匀。保持板条干燥。
6. 洗板:同前。肝素抗凝)、
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。第一管加标本稀释液900ul,画出标准曲线。
2. 洗涤过程很关键。250、向滤纸上印干。如此反复作对倍稀释,加入底物工作液显蓝色,GSK-3浓度与OD值成正比,洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。
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