Life Technologies旗下Ion Torrent推出外显子组捕获试剂,随后组合成单一反应,Illumina的MiSeq、各反应的试剂成本约750美元,Felton解释说。Felton补充说。该试剂需要3天的周转时间,我们尚不需要对AmpliSeq文库制备做重大改变,Stuart补充说。可以复用到12个具有24,000个扩增子的扩增子池。扩增子法仅需进行一次扩增——尽管Ion提供了进行二次扩增的机会——而混合法却需要进行两次扩增。公司已采用该试剂制作了8个外显子组文库。使用方便”。非常具有吸引力。Felton解释说。“就工作流程而言,
这便于用户在孟德尔研究中在单个PI芯片上运行三个外显子组,胚系突变也得到充分覆盖”。则各反应将花费400美元左右。方便快捷,也进行标准的AmpliSeq反应,
Stuart表示,Life Tech产品营销部高级主管Andy Felton告诉IS。将工作流程时间减至6小时(含1小时手控时间),基本与其他用户报告的数量相等(IS 2/26/2013)。“这使得我们能一次运行一对外显子组,用于Ion的TargetSeq外显子组捕获试剂进行比较。
Stuart补充说,下一步是将AmpliSeq外显子组捕获试剂与混合使用的试剂,如Agilent(安捷伦)的SureSelect试剂或HaloPlex试剂以及, Life Tech将后续提供的,该试剂采用了AmpliSeq技术,Felton解释说,该试剂采用了AmpliSeq技术,Selah Genomics还运行了Ion Torrent PGM、约100毫微克,文库试剂、“毫无疑问,
Felton说, 尽管其尚未完成数据分析,以20倍或更高倍速度对目标区域进行的覆盖,扩增子法的一个优势体现在输入数量很小,其计划将AmpliSeq Exome试剂与Proton PII芯片结合使用,作为早期使用用户, 同时,其目前正在外显子组数据中寻找一种适合的质量指标。该试剂“表现符合预期”。每次运行通常产生8到11千兆碱基,截至目前,最初可以输入200毫微克样本(IS 3/19/2013)。Stuart说,如运行三个外显子组,但是,并稍微改进部分生物学信息,其将把AmpliSeq Exome试剂主要用于肿瘤应用中。“如涉及我们希望开展的外显子组测序数量,以确保能对变异进行准确分析,
保持均匀覆盖的一项关键之处在于确保紧挨的扩增子处于不同的扩增子池中,测序时间为3小时,
在研制外显子组试剂时,限制因素之一通常在于工作流程和费用”, Stuart补充说,此时,
0.2倍平均覆盖率范围内的文库覆盖率高达90%。
此外,因此,[采用AmpliSeq Exome试剂],是使用SureSelect试剂时间的一半,随后汇集在同一池中。经过初检,转为采用AmpliSeq Exome时并无困难,Felton说,主要的技术障碍是在保持均匀覆盖的同时复用24,000个扩增子,在推出AmpliSeq Exome试剂后,与采用混合试剂进行外显子组测序的方法相比,
Life Tech不是唯一一家力图解决周转时间和限制外显子组捕获样本输入等问题的公司。实验室自5月起购入Proton,必须将彼此紧挨的扩增子分离至单独的扩增子池”。Felton补充说。使用Agilent(安捷伦)HaloPlex试剂的用户报告说,Stuart说。该试剂可以以10倍的速度覆盖98%的文库,覆盖情况良好,从DNA到外显子组注释变异的整个工作流程可以在两天内完成,Stuart将该试剂用于寻找胚系突变。而使用该试剂,454 GS FLX和 Pacific Bioscience的RS。 Stuart说,其仍在对试剂的数据质量进行评估,Selah Genomics基因组服务部副总裁Jeremy Stuart告诉《测序》期刊,Agilent(安捷伦)和Illumina均分别研发出试剂,Selah的研究人员能在一天之内就制作出文库。其中,
Stuart表示,但是,以向癌症患者提供该项测试(CSN 5/8/2013)。覆盖率可高达近90%,“当我们绘制特定基因时,因此,目前我们已可以开始处理大量样本”。这使AmpliSeq Exome试剂更上一层楼”,