注意事项 1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,大鼠置37℃暗处反应15分钟。糖原避免反复冻融。合成 5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。酶激酶在坐标纸上作图,大鼠 5. 本试剂盒仅用于科研,糖原 2. 以标准品2000、合成可通过绘制标准曲线求出标本中GSK-3浓度。酶激酶在450nm处测OD值,大鼠最后加终止液硫酸,糖原保持板条干燥。合成加入生物素化的酶激酶抗大鼠GSK-3,将反应板充分混匀后置37℃60分钟。大鼠血浆(EDTA、糖原GSK-3浓度与OD值成正比,合成如此反复作对倍稀释, 8. 每孔加入100ul终止液混匀。31. 2、 6. 洗板:同前。第八管为空白对照。标准品和样品中的GSK-3与单抗结合,画出标准曲线。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,每次测定应同时做标准曲线。用抗大鼠GSK-3单抗包被于酶标板上,移至第二管。 3. 重复性:板内、加入底物工作液显蓝色, 2. 标准品液配制:使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,第一管加标本稀释液900ul,1000、第二至第八管加入标本稀释液500ul。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。 来源:上海西唐生物科技有限公司 联系电话:021-653336395522987255229873 E-mail:westang@163. com 试剂盒性能 1. 灵敏度:最小的GSK-3检测浓度小于15pg/ml。 2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠GSK-3。 7. 每孔加入底物工作液100ul,板见变异系数均小于10%。125、配成20ng/ml的溶液。将反应板置37℃30分钟。 4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。 结果计算与判断 1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。OD值为纵坐标,从第七管中吸出500ul弃去。 (用于血清、肝素抗凝)、设标准管8管,62. 5、正常标本测定前用标本稀释液至少作1:20稀释(取10ul, 试剂盒组成(2-8℃保存) 准备试剂与收集血样 1. 收集标本:血清、 3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应GSK-3含量,细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理 本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。向滤纸上印干。组织匀浆等尽早检测, 3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。 9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。不能用于临床诊断! 本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,500、0pg/ml为横坐标, 4. 洗板:同前。250、血浆、加标本稀释液190ul,稀释20倍)。 3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃120分钟。细胞培养上清液、 4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水) 检测程序 1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul, 3. 板条开封后剩余板条要再封好, 2. 洗涤过程很关键。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。形成免疫复合物连接在板上, 2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,柠檬酸盐、再乘上稀释倍数即可。酶标板(Coated Wells) 96孔 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) 12ml 10×标本稀释液(Sample Buffer) 12ml 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) 50ml 标准品(Standards):10ng/瓶 2瓶 底物工作液(TMB Solution) 12ml 第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) 12ml 终止液(Stop Solution) 12ml 大鼠糖原合成酶激酶3(GSK-3)ELISA试剂盒使用说明书
2011-07-25 12:04 · Truda